Elevada frequência de Aeromonas spp. e genes de virulência em cultivos de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) em tanques-rede, na região semiárida de Pernambuco, Brasil / High frequency of Aeromonas spp. and virulence genes in Nile Tilapia farms (Oreochromis niloticus) in semi-arid regions of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se avaliar a ocorrência de Aeromonas spp. em peixes e amostras de água na região semiárida de Pernambuco e avaliar a frequência de aerolissina (aerA), enterotoxina citotóxica (act), enterotoxina citotônica (alt) e serina protease (ahp) nesses isolados. Foram analisados 70 peixes vivos e oito mortos com sinais clínicos de aeromoniose e 16 amostras de água. Aeromonas spp. foram identificadas por análises microbiológicas (provas bioquímicas) e molecular, usando-se primers específicos para a região 16S rRNA, e a distribuição dos quatro fatores de virulência (aerA, alt, act e ahp) foi investigada por ensaio de PCR. Cento e cinquenta e cinco (84,7%) isolados foram confirmados como Aeromonas spp. na análise molecular. Os genes de virulência mais frequentes foram act (53,55%) e aerA (51,61%). De acordo com o tipo de amostra, observou-se maior frequência do gene aerA (87,5% P=0,0474) em isolados de peixes mortos e a menor frequência do gene act (47,73% P=0,0002) em peixes vivos. Este estudo demonstrou a presença de aeromoniose no cultivo de tilápias em tanques-rede, nos municípios de Jatobá e Petrolândia, na região semiárida de Pernambuco. A detecção de aerA, act e alt pode ser utilizada na tipagem de virulência de Aeromonas spp.(AU)

The purpose of this study was to evaluate the occurrence of Aeromonas spp. from fishes and tilapia net-cage farm water in semi-arid regions of Pernambuco and to evaluate the frequency of the aerolysin (aerA), cytotoxic enterotoxin (act), cytotonic enterotoxin (alt) and serine protease (ahp) genes in Aeromonas isolates. 70 live and eight dead fish with aeromoniosis clinical signs and 16 water samples were analyzed. Aeromonas spp. isolated were identified by microbiological (biochemical evidence) and molecular analysis using specific primers for 16SrRNA region, while the distribution of four virulence factors, including aerA, alt, act and ahp, was investigated by PCR assay. One hundred fifty-five (84.7%) isolates were confirmed as Aeromonas spp. by molecular analysis. The most frequent virulence genes in isolates were act (53.55%) and aerA (51,61%). According to the kind of sample, the higher frequency of aerA gene (87.5% P= 0.0474) was observed in isolates from dead fish and the lowest frequency of act gene (47.73% P= 0.0002) from live fish. This study found the presence of aeromoniosis on tilapia farming in net-cages on Jatobá and Petrolândia counties in the semiarid Pernambuco region. The detection of aerA, act and alt can be used for virulence typing of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Efeito da utilização de própolis vermelha em salame de peixe no crescimento de bactérias láticas fermentadoras / Effect of the use of red propolis in salami of fish in the growth of fermenting lactic bacteria

O presente estudo teve como objetivo verificar a atividade antimicrobiana do extrato de própolis vermelha em salame de tilápia. Para isso, foram elaborados três tratamentos de salame: T1 = 0,1% de extrato de própolis, T2 = 0,2% de extrato de própolis e T3 = 0,2% de sal de cura (controle). Os tratamentos foram avaliados quanto a quantificação de bactérias mesófilas e bactérias láticas, e o pH durante 15 dias de maturação do salame. O extrato de própolis não interferiu no crescimento das bactérias láticas, mas também não inibiu a presença de bactérias mesófilas. Nos primeiros cinco dias de fermentação o pH diminuiu (pH 5,9 ), aumentando posteriormente ao final da maturação dos salames (pH 6,8). Conclui-se que é preciso testar concentrações mais altas da própolis vermelha em embutidos cárneos fermentados a fim de se obter uma ação mais eficiente contra bactérias mesófilas.

Detecção de Aeromonas spp. e do gene de virulência aerolisina em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) com a técnica de mPCR / Detection of Aeromonas spp. and virulence gene aerolysin in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) using PCR technique

As infecções causadas por bactérias do gênero Aeromonas estão entre as doenças mais comuns em peixes cultivados em todo o mundo, com ocorrência de aeromoniose em todos os países que possuem cultivo de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus). O presente trabalho descreve o desenvolvimento de uma nova multiplex PCR (mPCR) para diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina (aerA). Para padronização da mPCR foram utilizadas cepas de referência de várias espécies do gênero Aeromonas e de outros gêneros. Também foram usadas cepas de campo de A. hydrophila oriundas de cultivos de peixes pacamãs (Lophiosilurus alexandri) e Aeromonas spp. de tilápias do Nilo. Os primers foram desenhados com base na região 16S rRNA e aerA. Para verificar a melhor temperatura de anelamento foram utilizados gradientes entre 59°C a 61°C com 40ng de DNA molde. Os produtos da amplificação da região 16S rRNA e do gene aerA apresentaram 786 e 550pb, respectivamente. A mPCR apresentou melhor temperatura de anelamento a 57,6°C com limite de detecção das concentrações de DNA em ambos genes (16S rRNA and aerA) de 10-10g/μL. A mPCR padronizada é rápida, sensível e específica no diagnóstico de Aeromonas spp. e identificação do gene aerolisina. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos métodos de diagnóstico convencionais, podendo ser utilizada em cultivos comerciais de tilápias do Nilo ou outros peixes. A identificação do gene aerolisina é uma importante ferramenta na determinação do potencial patogênico dos isolados de Aeromonas spp. estudados.(AU)

Infections caused by bacteria of the genus Aeromonas are among the most common diseases in fish farming systems worldwide, and this disease occurs in all countries which have Nile tilapia (Oreochromis niloticus) farmed. The present work describes the development of a new multiplex PCR (mPCR) technique that diagnosis the genus Aeromonas and detects aerolysin gene (aerA). Reference strains of several Aeromonas species and other genera were used for standardization of mPCR. Strains of A. hydrophila from "pacaman" fish (Lophiosilurus alexandri) and Aeromonas spp. from Nile tilapia from farming systems were used too. Primers were designed based on the 16S rRNA region and aerA (aerolysin toxin). To verify a better annealing temperature were used gradients between 59°C and 61°C with 40ng of the DNA template. The 16S rRNA gene and the aerA gene amplification products showed 786 and 550 bp, respectively. The mPCR showed better annealing temperature at 57.6°C, and the detection limit for both genes (16S rRNA and aerA) was 10-10g/μL of the DNA. The standardized mPCR is quick, sensitive, and specific for Aeromonas spp. diagnosis and to detect aerolysin gene. This method showed advantages when compared to the conventional diagnostic methods and can be used in Nile tilapia or other fish farming systems. The detection of aerolysin gene is an important tool to determine the potential pathogenicity of Aeromonas spp. isolates.(AU)

Activity of Brazilian propolis against Aeromonas hydrophila and its effect on Nile tilapia growth, hematological and non-specific immune response under bacterial infection

ABSTRACT The effect of the ethanolic extract of propolis (EEP) on Aeromonas hydrophila was analyzed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC). Then, the effects of crude propolis powder (CPP) on growth, hemato-immune parameters of the Nile tilapia, as well as its effects on resistance to A. hydrophila challenge were investigated. The CPP (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 and 3.0%) was added to the diet of 280 Nile tilapia (50.0 ± 5.7 g fish-1). Hemato-immune parameters were analyzed before and after the bacterial challenge. Red blood cell, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC), and hydrogen peroxide (H2O2) and nitric oxide (NO) were evaluated. The MIC of the EEP was 13% (v/v) with a bactericidal effect after 24 hours. Growth performance was significantly lower for those fish fed diets containing 2.5 and 3% of CPP compared to the control diet. Differences in CPP levels affected fish hemoglobin, neutrophils number and NO following the bacterial challenge. For others parameters no significant differences were observed. Our results show that although propolis has bactericidal properties in vitro, the addition of crude propolis powder to Nile tilapia extruded diets does not necessarily lead to an improvement of fish health.

Avaliação físico-química, microbiológica e sensorial de tilápias do nilo (Oreochromis niloticus) inteiras evisceradas submetidas a salga e secagem natural / Evaluación físico-química, microbiológica y sensorial de tilapias del nilo (Oreochromis niloticus) enteras evisceradas sometidas a sal y secado natural / Physicochemical, microbiological and sensorial evaluation of clean whole Nile tilapias (Oreochromis niloticus) submitted to salting and natural drying

Os peixes são produtos de grande valor nutritivo, além de ser uma atividade econômica, para produção de alimentos que mais cresce no mundo.Assim,o presente trabalho teve como objetivo avaliar físico quimicamente, microbiologicamente e sensorialmente amostras de tilápias após a salga e secagem natural seguidas de armazenamento à temperatura ambiente por 30 dias. Os resultados indicam que o processo de salga e secagem foi efetivo, resultando na diminuição da umidade e na penetração do sal para o interior do pescado. Microbiologicamente o produto obtido foi estável e obedecia aos padrões da ANVISA. Os provadores não foram capazes de identificar a amostra contendo o produto, quando comparadas com formulação contendo bacalhau comercial e batatas, sendo ainda que sensorialmente o produto obteve uma boa aceitação para os atributos de textura, cor, aroma e sabor.

Fishes are products of great nutritional value and an economical activity for production of the fastest growing food in the world. This work had as objective evaluates physical-chemically, microbiologically and sensorially tilapias samples after salting and natural drying following by storage to room temperature for 30 days. The results indicate that the process of salting and drying was effective, resulting in the decrease of the water contents and in the penetration of the salt for the interior of the fish, microbiologically the obtained product was stable and it obeyed the patterns of ANVISA. The painelists were not capable to identify the sample containing the product when compared with formulation containing commercial cod and potatoes, being although sensorially the product obtained a good acceptance for the texture, color, aroma and flavor atributes.

Los peces son productos de gran valor nutritivo, además de ser una actividad económica para producción de alimentos que más crece en el mundo. Así, esta investigación tuvo el objetivo de evaluar físico, químicamente, microbiológicamente y sensorialmente muestras de tilapias después de saladas y secados natural, seguidas de almacenaje a temperatura ambiente por 30 días. Los resultados indican que el proceso de salado y secado fue efectivo, resultando en la disminución de la humedad y en la penetración del sal para el interior del pescado. Microbiológicamente el producto obtenido fue estable y obedecía las normas de la ANVISA. Los probadores no fueron capaces de identificar la muestra conteniendo el producto, cuando comparadas con formulación conteniendo bacalao comercial y patatas, siendo que sensorialmente el producto obtuvo buena aceptación para los atributos de textura, color, aroma y sabor.

Antibacterial effect (in vitro) of Moringa oleifera and Annona muricata against Gram positive and Gram negative bacteria / Efeito antibacteriano (in vitro) de Moringa oleifera (moringa) e Annona muricata (graviola) frente a bactérias Gram-negativas e Gram-positiva

Antibacterial effects of aqueous and ethanolic extracts of seeds of moringa (Moringa oleifera) and pods of soursop (Annona muricata) in the concentration of 1:5 and 1:10 in volumes 50, 100, 150 and 200 µL were examined against Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli (isolated from the organism and the aquatic environment) and Salmonella Enteritidis. Antibacterial activity (inhibition halo > 13 mm) against S. aureus, V. cholerae and E. coli isolated from the whiteleg shrimp, Litopenaeus vannmaei, was detected in aqueous and ethanolic extracts of moringa. E. coli isolated from tilapiafish, Oreochromis niloticus, was sensitive to the ethanolic extract of moringa. The aqueous extracts of soursop showed an antibacterial effect against S. aureus and V. cholerae, but the antibacterial activity by the ethanol extracts of this plant was not demonstrated.

Para avaliação do efeito bactericida frente à Staphylococcus aureus, Vibrio cholerae, Escherichia coli (isolada de pescados e ambiente aquático) e Salmonella Enteretidis, foram testados extratos aquosos e etanólicos de sementes de moringa (Moringa oleifera) e casca de graviola (Annona muricata) na concentração de 1:5 e 1:10, nos volumes de 50, 100, 150 e 200 µL. Os resultados mostraram efeito antibacteriano (halo de inibição > 13mm) dos extratos aquosos e etanólicos de moringa frente a S. aureus, V. cholerae e E. coli isoladas de camarão cinza Litopenaeus vannmaei. A cepa de E. coli isolada do pescado Oreochromis niloticus apresentou sensibilidade frente ao extrato etanólico de moringa. Os extratos aquosos de graviola apresentaram efeito bactericida frente a S. aureus e V. cholerae, entretanto, os extratos etanólicos dessa planta não mostraram atividade antibacteriana.

Isolation and identification of Flexibacter columnaris in cultured fish in Egypt

The present study was carried-out on naturally infected fish with Flexibacter columnaris. The number of fish examined were 100 fish collected from different farms of O. niloticus, Common carp, Clarias lazera in Behera, Kafr El-Sheikh and Alexandria Governorates. The clinical signs and Post mortem [P.M.] lesions includes erosions of jaws with congestion all over the body, haemorrhage and inflammation with darkening of body colour and enlarged, congested spleen and kidney. Trails for isolation of Flexibacter columnaris from different organs were made and we successfully isolate 4 strains grow on specific media [Ordal's] with yellow colonies, Gram negative short rods, non capsulated from [O. niloticus and Common carp] only. Biochemically it oxidase, ureas and indole negative, while, positive with glucose and maltose. Due to the morphological and biochemical characters of the isolates we identified it as Flexibacter columnaris especially the presence of rod like shape. The isolates were highly sensitive to antibiotics especially, Neomycin, Pencillin and Erythromycin

Isolation and identification of ichthiophonus hoferi from cultured fish

The Icthyophonosis is a dangerous disease, the consequences of which are difficult to assess for wild populations of fish. This study aimed to throw the light on the importance of I. hoferi on fresh water fish, it dangerious effect in addition to its identification of isolation, characterization and the most important symptoms showed on naturally infected Oreochromis niloticus with I. hoferi showing deformity of vertebral column, darkening in color, sand paper appearance of skin, poor appetite listlessness. The young culture of I. hoferi on SDA t 10% bovine serum showing rupture of multinucleated bodies and release of spores through extra material discharge after 9 days. At PH 3.5 showing starting of hyphal growth after shours post-culturing the lyphae produce many branches, extending of the hyphae to grow and increase in length after 24 hours, migration of cytoplasm to the apexes of hypae after 3 days, rounding up of the apics of the hyphae after 7 days, finally all the hyphae rounding up to form sphericael hyphae terminal bodies after 10 days. Rounding up of the apics of the hyphae after 7 days, finally all the hyphae rounding up to form sphericael hyphae terminal bodies after 10 days and in old culture showing chlamydospores formation around the multinucleated bodies and extend to the test of sticked hyphae at 3 weeks

Haematological changes in Nile tilapia experimentally infected with Enterococcus sp[period] / Alterações hematológicas em tilápia do Nilo infectada experimentalmente com Enterococcus sp[ponto final]

This study evaluated the haematological changes in Nile tilapia experimentally infected with 1 x 10³ and 1 x 10(6) colony-forming units (CFU)/mL of Enterococcus sp. in the swim bladder. The experiment consisted of four treatments in triplicates: non-injected fish (NI); fish injected with 1 mL of sterile saline solution 0.65 percent (SAL); fish injected with 1 x 10³ and 1 x 10(6) CFU/mL of Enterococcus diluted in 1 mL sterile saline. Twenty-four hours after injection, the fish were anesthetized and the blood collected. The haematological tests included red blood cell (RBC) and white blood cell (WBC) counts, hematocrit, number of total thrombocytes, and differential counting of WBC. Fish injected with 1 x 10(6) CFU/mL of Enterococcus showed a higher number of thrombocytes than the other treatments. White blood cell and lymphocyte numbers increased significantly in fish injected with 1 x 10(6) CFU/mL of Enterococcus when compared to non-injected control. There was significant increase in the number of neutrophils in saline injected fish and reduced number of monocytes after injections with 1 x 10(6) CFU/mL of Enterococcus. Hematocrit increased in fish injected with 1 x 10³ and 1 x 10(6) CFU/mL of Enterococcus.

Este estudo avaliou alterações hematológicas em tilápia do Nilo infectada experimentalmente com 1 x 10³ e 1 x 10(6) unidades formadoras de colônia (CFU)/mL de Enterococcus sp. na bexiga natatória. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições cada: peixes não injetados (NI); peixes injetados com 1 mL de solução salina a 0,65 por cento esterilizada (SAL); peixes injetados com 1 x 10³ e 1 x 10(6) CFU/mL de Enterococcus diluída em 1 mL de solução salina esterilizada. Vinte e quatro horas após as injeções, os peixes foram anestesiados com benzocaína e o sangue coletado. Os testes hematológicos incluíram as contagens totais de eritrócitos (RBC), de leucócitos (WBC) e de trombócitos, o percentual do hematócrito e a contagem diferencial de leucócitos. Peixes injetados com 1 x 10(6) CFU/mL de Enterococcus mostraram maior número de trombócitos no sangue do que os dos outros tratamentos. O número de leucócitos totais e o número de linfócitos foram significativamente mais altos após injeção de 1 x 10(6) CFU/mL de Enterococcus, quando comparados ao controle não injetado. Houve aumento no número de neutrófilos nos injetados com salina e redução no número de monócitos nos injetados com 1 x 10(6) CFU/mL de Enterococcus. O hematócrito aumentou nos animais injetados com 1 x 10³ e 1 x 10(6) CFU/mL de Enterococcus.